毛細管電泳(CE)基因分析儀平臺,你知道有哪些嗎?
1987年,賽默飛Applied Biosystems在Sanger測序原理的基礎上發布第一代真正商業化的自動測序儀。
1996年,推出310型全自動遺傳分析儀,實現全部操作自動化,包括自動灌膠、自動進樣、自動數據收集分析等。也標志著從平板膠進入毛細管電泳時代。
隨后,伴隨著儀器的更新,通量逐漸提高,出現我們常見的3130系列、3730系列以及經典的3500系列。其中3500Dx和3500xl Dx基因分析儀已獲得NMPA認證。
站在巨人的肩膀上,2017年,推出最簡便、自動化程度最高的一款基因分析儀,它就是SeqStudio。
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經過數十年結果的驗證,Sanger測序是DNA測序的金標準,此外,多重片段分析也是您廣泛應用的遺傳分析技術。
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Sanger測序的工作流程從樣本制備到最終數據分析,包括PCR擴增、PCR產物純化、循環測序、測序反應純化、毛細管電泳和數據分析。如圖,賽默飛提供Sanger測序全套解決方案。
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測序試劑盒可以根據具體的實驗需求進行選擇,可參考如下的表格:
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* Recommended: ++
* Satisfactory: +
* Not recommended: -
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Sanger測序流程中,循環測序反應時PCR產物的用量究竟要加多少?
不同長度的PCR片段對產物的需求量不一樣,一般可參考如下列表:
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POP4聚合物可實現快速反應,更適合于人類身份鑒定和片段分析。POP6聚合物是進行長片段測序的理想選擇。當和BigDye V1.1一起使用時,POP-6也可以用于測定非常靠近5’端的堿基。POP-7聚合物介于POP-4和POP-6之間,他非常的靈活,適用于很多的應用。
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一種是在引物5’端標記熒光基團,另一種是用熒光標記ddNTP。
5’端引物標記通常用于微衛星序列分析;熒光標記ddNTP通常用于SNaPshot多重分析。
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片段分析實驗常用的熒光染料組合有哪些?分別包含哪些熒光染料?
片段分析實驗常用的熒光染料組合為G5和E5。
G5染料組合包括6-FAM、VIC、NED、PET和LIZ,通常用于微衛星序列分析。
E5染料組合包括dR110、dR6G、dTAMRA、dROX和LIZ,主要用于SNaPshot 重分析。
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· 測序數據.ab1文件建議用Sequence Analysis軟件進行分析;
· 片段分析數據.fsa文件建議用GeneMapper軟件進行分析;
· 人類鑒定數據.hid文件建議用GeneMapper ID-X軟件進行分析