一、酶標(biāo)儀的選擇
面對類型如此眾多的酶標(biāo)儀,實驗室在選擇時往往有難以適從的感覺。一般來說,用于酶免疫測定比色的酶標(biāo)儀可分為普通酶標(biāo)儀,多功能全自動酶標(biāo)儀和全自動酶免疫分析系統(tǒng)等,普通酶標(biāo)儀的功能基本上相當(dāng)于一個微孔板比色計,而多功能全自動酶標(biāo)儀除了有微孔板比色功能外,還有酶標(biāo)動力學(xué),紫外乃至凝集等多種檢測功能;全自動酶免疫分析系統(tǒng)則有試劑“開放”和“限定”之分,所謂試劑“開放”是指不同品牌的ELISA試劑均可用于該儀器,而試劑“限定”則必須使用儀器專用的酶免測定試劑。實驗室在選擇酶標(biāo)儀時,一般應(yīng)遵循這樣幾條原則:
1根據(jù)工作需要去選擇
切忌刻意去求功能多,因為一則如果儀器功能過多,易出故障,二則有些功能如酶標(biāo)動力學(xué)或凝集等,可能根本就用不上;如果擬購置的酶標(biāo)儀主要是用于定性測定,則不必要求完美的定量所需的軟件系統(tǒng)。至于全自動酶免疫分析系統(tǒng)則對工作量比較大的血站或大型醫(yī)院較為適用,對于日常工作量不太大的實驗室,就無必要。
2根據(jù)酶標(biāo)儀的性能去選擇
反應(yīng)酶標(biāo)儀性能的指標(biāo)主要有測定波長范圍,濾光片配置,檢測速度,吸光度范圍,線性范圍,分辨率,準(zhǔn)確度,精密度等。
3根據(jù)自己實驗室的財力去選擇
酶標(biāo)儀品種類型多,由于性能不一,價格自然也就相差較大,實驗室可根據(jù)自己的財力去選擇性能/價格比較為合適的酶標(biāo)儀。
4根據(jù)售后服務(wù)去選擇
實驗室儀器買了以后,就跟我們家里使用的家用電器一樣,在使用過程中及使用一段時間之后,很可能就會有保修或維修方面的問題,因此一定要選擇售后服務(wù)好的公司的酶標(biāo)儀。
5根據(jù)實驗室人員的外語水平去選擇
進(jìn)口酶標(biāo)儀現(xiàn)有不少已使用中文人機(jī)對話,對于英語上有困難的實驗室,應(yīng)盡可能選用此類酶標(biāo)儀。
確定了選擇原則以后,就是怎樣去選擇了。選擇的步驟首先是要獲取有關(guān)酶標(biāo)儀的信息資料,一般有這樣幾條途徑:
①向已購不同酶標(biāo)儀的多家實驗室同行咨詢訪問,獲取最直接的使用效果的信息;
②酶標(biāo)儀銷售商的信息廣告及介紹;
③權(quán)威機(jī)構(gòu)的儀器評估報告。
獲取了盡可能多的酶標(biāo)儀信息資料后,就是對不同類型的酶標(biāo)儀的性能指標(biāo)進(jìn)行比較,選擇較為適合本實驗室的一種或二,三種再向銷售商作進(jìn)一步的詳細(xì)咨詢了解,以決定選擇哪一種進(jìn)行自檢。
二、酶標(biāo)儀的自檢和校準(zhǔn)
從上述所獲的酶標(biāo)儀性能的有關(guān)信息資料,基本上可以說是間接的,有了目標(biāo)以后,如果還想獲得對某一酶標(biāo)儀的感性認(rèn)識,可以對其進(jìn)行自檢,主要有下述幾個方面。
1外觀
酶標(biāo)儀上應(yīng)有儀器名稱,型號,編號,生產(chǎn)廠家,出廠日期和電源電壓;各調(diào)節(jié)旋鈕,按鍵和開關(guān)均能正常工作,外表面無明顯機(jī)械損傷;顯示文字應(yīng)清楚完整。
2酶標(biāo)儀的穩(wěn)定性(漂移)
選用492nm波長,在吸光度o.0A處,測定標(biāo)稱值為1.0A的光譜中性濾光片(測定操作按儀器說明進(jìn)行),記錄儀器示值或均值,10min后再次記錄儀器示值或均值,前后兩次測定值之差不應(yīng)超過±0.005A。
3吸光度測定的準(zhǔn)確度
選用405,492和620 nm波長,以空氣為參比,分別測定標(biāo)稱值為0.5和1.0A的光譜中性玻璃濾光片,用專用測試板代替酶標(biāo)板,按儀器說明連續(xù)測定3次,按下式計算準(zhǔn)確度:AA=1/3(A、+A。+A3)—A:(A:為標(biāo)準(zhǔn)值)。
4吸光度測定的重復(fù)性
波長選擇同(3),在酶標(biāo)板第一排加注空白溶液,第二排加入濃度為200rig/ml的重鉻酸鉀溶液,重復(fù)測定5次。記錄每次測定的第二排吸光度值,取第二排任一孔吸光度值與各次對應(yīng)孔吸光度值。按下式計算重復(fù)性:
5酶標(biāo)儀的線性
選用540nm波長,將標(biāo)稱值o.5,1.0A中性濾光片分別放入專用測試板樣本位置中,以空氣為參比,各重復(fù)測定3次;然后將以上兩片中性濾光片疊加后置于專用測試板的同一孔位中,重復(fù)測定3次。線性誤差:
式中A1為第一片中性濾光片吸光度均值,A:為第二片中性濾光片吸光度均值,A1,2為兩片中性濾光片疊加后的吸光度均值。
6測定速度的檢定
選用492nm波長,放人96孔酶標(biāo)板進(jìn)行測定,用秒表計測儀器打印出全部數(shù)據(jù)的時間。
酶標(biāo)儀除了在選購時,應(yīng)盡可能自檢外,在使用中也應(yīng)定期檢定,以保證酶標(biāo)儀測定的有效性。
附:200ttg/ml重鉻酸鉀溶液的配制
將重鉻酸鉀固體試劑放人稱量瓶中(去蓋)置于烘箱中,在105±5℃下烘2h后,置于干燥器內(nèi)冷卻30min,在分析天平上準(zhǔn)確稱取o.2829g,置于100ml燒杯中,用o.05mol/L稀硫酸溶解后,移入500ml容量瓶中,以少量o.05mol/L稀硫酸洗燒杯3次,洗液并入容量瓶中,用0.05mol/L稀硫酸稀釋至刻度線,搖勻。